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Zaragoza, 18 a 21 de mayo de 2011 - PORTADA - PROGRAMA CIENTÍFICO - PROGRAMA DE COMUNICACIONES Y PÓSTERES (PDF)

 INFORMACIÓN SOBRE COMUNICACIONES ORALES Y PÓSTERES ACEPTADOS

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Comunicación oral nº 119. Tema: Técnicos de Anatomía Patológica (TEAP)

Técnica de procesamiento de células para estudio ultraestructural: Experiencia en 48 casos con fines diagnósticos y experimentales
P Parrales Bernal, M García, Justo, MV Jerez Esteban, A González Nuñez, A I Rodríguez Vila, S Roca Terricabris, A Barberá, Pla, A Ariza Fernández
Germans Trias i Pujol, Hospital
puriparrales@yahoo.es

Introducción:El estudio de material celular mediante microscopía electrónica tiene aplicaciones en el diagnóstico por citología exfoliativa y punción aspiración. También puede utilizarse en el estudio de células cultivadas para tipificación celular o como medio de crecimiento de virus. Es importante que la técnica de procesamiento respete la fragilidad de las células aisladas y evite la pérdida de celularidad.

Material y métodos:Entre los años 1988 y 2010 se han estudiado 49 muestras de suspensiones celulares, de las que 18 correspondían a lavados y aspirados alveolares (BAS/BAL) y 31 a cultivos celulares. De estos últimos, 13 sirvieron para tipificación y 18 para investigación de mecanismos de transmisión vírica. El procesamiento se inició a partir de una suspensión celular que se fijó entre 3 y 5 horas y después se tiñó con osmio. Tras ello se efectuaron lavados intermedios con centrifugaciones, eliminación de sobrenadante, resuspensiones y preinclusión en agar-agar para construcción de bloques. Las células fueron así más fácilmente manejables en la inclusión en resina. La aglutinación de las células facilitó su observación y la consistencia adquirida favoreció la realización de cortes ultrafinos.

Resultados: Todas las muestras experimentales (31 cultivos celulares) fueron adecuadas para su evaluación. En cambio, sólo 11 de los 18 BAS/BAL contenían un número suficiente de células epiteliales, mientras que en las 7 muestras restantes la celularidad resultó ser insuficiente. Se identificaron como puntos críticos para la obtención de muestras de calidad óptima los siguientes: centrifugaciones, preparación del agar-agar y dispersión de las células (la dispersión adecuada es necesaria para que el agar-agar penetre entre las células, sin que por otra parte queden muy separadas).

Conclusión:Este trabajo ha permitido identificar puntos críticos en el procesamiento de suspensiones celulares para microscopía electrónica, técnica que puede aportar información importante para la tipificación celular y el conocimiento de los mecanismos de transmisión vírica. Por otra parte, la utilidad del estudio ultraestructural puede ser limitada en los BAS/BAL, lo que se debe a la pobre celularidad de este tipo de muestras.

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