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Zaragoza, 18 a 21 de mayo de 2011 - PORTADA - PROGRAMA CIENTÍFICO - PROGRAMA DE COMUNICACIONES Y PÓSTERES (PDF)

 INFORMACIÓN SOBRE COMUNICACIONES ORALES Y PÓSTERES ACEPTADOS

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Póster nº 7. Tema: Nuevas tecnologías (inmunohistoquímica, inmunocitoquímica y patología molecular)

Estudio comparativo de la detección de la mutación V600E en el oncogén BRAF mediante dHPLC, HRM y discriminación alélica por TaqMan
P Conesa Zamora (1), MC Turpin Sevilla (1), D Torres Moreno (1), I Molina Martínez (1), M Pérez-Guillermo García (1), MC Marín Serrano (1), P Carbonell Meseguer (2)
(1) Hospital Universitario Santa María del Rosell, (2) Centro Genética Bioquímica Clínica, Murcia
pablo.conesa@carm.es

Introducción:La mutación V600E en el oncogén BRAF se ha asociado con los carcinomas colorrectales (CCR) con defectos en las proteínas de reparación de “mismatch” y recientemente que la no respuesta a la terapia anti-EGFR en CRC en estadío IV. Por tanto es importante el uso de técnicas fiables y económicas para su detección.

Material y métodos:El objetivo de nuestro estudio fue comparar la sensibilidad y especificidad en la detección de V600E de la cromatografía líquida desnaturalizante de alta resolución (dHPLC) y del análisis de “meeting” de alta resolución (HRM) con las técnicas de discriminación alélica usando sondas TaqMan y con secuenciación directa en una serie de 195 especímenes colorrectales de hasta 15 años de antigüedad.

Resultados:La efectividad para obtener resultados sobre el estado de la mutación fue major usando TaqMan (96.9%) seguido de dHPLC (93.3%), HRM (88.7%) y secuención (88.2%). En general, la técnica con TaqMan fue mejor en el análisis de tejidos más añosos mientras que la secuenciación fue la menos eficiente. La dHPLC y el HRM mostraron similares tasas de amplificación. La mutación V600E en heterocigosis fue detectada en el 11.6%, 9.9%, 11.6% y 9.9% de las muestras emplando TaqMan, dHPLC, HRM y secuenciación, respectivamente. Los resultados de concordancia entre dHPLC y TaqMan o secuenciación fueron excelentes (?:=0.9411, ?:=0.8988) mientras que para HRM la concordancia fue buena (?:=0.7973, ?:=0.7488). Mediante el uso de diluciones seriadas de ADN de líneas celulares con mutación V600E se estimó una sensibilidad del 1-5% en la detección del alelo V600E mediante dHPLC y HRM.

Conclusión:Los resultados indican que dHPLC y HRM son técnicas fiables que pueden ser utilizadas para la detección de la mutación V600E en material parafinado de archivo.

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