y División Española de la International Academy of Pathology
XX Congreso de la Sociedad Española de Citología
I Congreso de la Sociedad Española de Patología Forense
INFORMACIÓN SOBRE COMUNICACIONES ORALES Y PÓSTERES ACEPTADOS
Comunicación oral nº 81. Tema: Nuevas tecnologías (inmunohistoquímica, inmunocitoquímica y patología molecular)
Análisis de ADN mitocondrial (ADNmt) en muestras fijadas en formol e incluidas en parafina (FFPET): Efecto del formol en la estabilidad del ADN y sus consecuencias en estudios genéticos. Estudios preliminares
ZS Quintero Niño (1), S Cardoso (2), X Elcoroaristizabal (2), JJ Aguirre Anda (1), M Jo Velasco (1), FB Gutierrez (1), I Ferrer (3), I Guerra Merino (1), M Martinez de Pancorbo (3)
(1) Hospital Txagorritxu.Servicio de Anatomía Patológica, (2) Banco de ADN.Universidad del país Vasco, (3) Instituto de Neuropatología del Hospital Bellvitge
ZULMASORAYA.QUINTERONINO@osakidetza.netIntroducción:Las muestras de tejido fijadas en formol e incluidas en parafina (FFPET) son una de las fuentes de material biológico más importantes para estudios de epidemiología molecular y genético-forenses. El análisis de ADNmt a partir de muestras FFPET se realiza cuando no es posible analizar el ADN nuclear debido a la escasez o al estado de elevada degradación de la muestra. A pesar de que su uso está muy extendido, diversos estudios han demostrado que el formaldehido (H2CO), principal constituyente del formol, provoca alteraciones en el ADN nuclear. No obstante, sus efectos sobre el ADN mitocondrial no han sido estudiados aun.
Material y métodos:Se analizaron 105 muestras procedentes de 14 autopsias: 66 muestras FFPET con diferentes tiempos de fijación en formol (entre 1-4 semanas),10 muestras de sangre de la cavidad cardiaca y 29 de tejido fresco (corazón, pulmón, colon, cerebro y músculo esquelético).Para valorar el efecto del ácido fórmico, las muestras FFPET de cerebro de las autopsias AT11-AT14 se sometieron a distintos tiempos de tratamiento. En todas las muestras se amplificó mediante PCR el segmento HVS-Ia de la región de control o Dloop y un segmento de región codificante(12362-12602) del ADN mitocondrial. Las secuencias de ADNmt de sangre y/o tejido fresco de cada individuo fueron establecidas como secuencias de referencia.
Resultados:No se observaron cambios en la región codificante del ADNmt de las muestras FFPET Sin embargo, el análisis del segmento HVS-Ia de la región Dloop mostró numerosas variaciones entre las muestras FFPET y sus respectivas secuencias de referencia. La mayoría fueron heteroplasmias puntuales por transición, aunque también se observaron heteroplasmias puntuales por transversión y transiciones de base. El colon fue el tejido más afectado, seguido de corazón y músculo. Por otro lado, no se observó relación entre el tiempo de tratamiento con ácido fórmico y la aparición de alteraciones,asi como tampoco entre el tiempo de fijación en formol y la aparición de variaciones en el segmento HVS-Ia del ADNmt.
Conclusión:El ADNmt analizado a partir de muestras FFPET con respecto a muestras de referencia de sangre y/o tejido fresco presenta alteraciones genéticas no constitutivas del individuo.Éstas parecen estar directamente relacionadas con el proceso de fijación de los tejidos en formol, afectando particularmente a la región Dloop y no al segmento de región codificante analizado. En consecuencia, los resultados de este estudio hacen replantear la utilidad de las muestras FFPET para realizar estudios de la región Dloop del ADNmt.
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| © SEAP. Sociedad Española de Anatomía Patológica | Actualizado: 11/06/2011 |