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Zaragoza, 18 a 21 de mayo de 2011 - PORTADA - PROGRAMA CIENTÍFICO - PROGRAMA DE COMUNICACIONES Y PÓSTERES (PDF)

 INFORMACIÓN SOBRE COMUNICACIONES ORALES Y PÓSTERES ACEPTADOS

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Comunicación oral nº 78. Tema: Nuevas tecnologías (inmunohistoquímica, inmunocitoquímica y patología molecular)

Estudio comparativo de la técnica de secuenciación directa y el kit TheraScreen en el análisis de mutaciones de EGFR
L Martínez Avilés, E Arriola Aperribay, J Gimeno Beltran, R Longarón Rozalen, E Torres Fernández, L Pijuan Andujar, A Taus Garcia, G Navarro Viu, S Serrano Figueras, B Bellosillo
Hospital del Mar
luz.martinez.aviles@gmail.com

Introducción: Los inhibidores del receptor tirosina cinasa EGFR se emplean en el tratamiento de pacientes con cáncer de pulmón de célula no pequeña. Los pacientes que presentan mutaciones en EGFR tienen una mejor respuesta al tratamiento con estos inhibidores, de manera que el estudio de mutaciones de este gen en el diagnóstico de rutina tiene un importante valor predictivo. OBJETIVOS Comparar la sensibilidad analítica de dos metodologías distintas para la detección de mutaciones en el gen EGFR.

Material y métodos:Se analizó la presencia de mutaciones en EGFR en una cohorte de 200 pacientes con cáncer de pulmón de célula no pequeña, mediante dos metodologías:1. Amplificación de los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR mediante PCR y posterior secuenciación utilizando BigDye v3.1 y análisis en un Genetic Analyzer 3500Dx y 2. Análisis mediante el kit TheraScreen utilizando un equipo de PCR cuantitativa en tiempo real, Applied Biosystems 7500 Fast.

Resultados:El análisis de EGFR mostró una concordancia del 97% entre las dos técnicas. Del total de pacientes, 169 (85%) no presentaban mutaciones en EGFR, mientras que 31 (15%) pacientes presentaron mutaciones. En 4 de los 31 pacientes con mutaciones en EGFR las mutaciones sólo se detectaron con el ensayo TheraScreen ya que el porcentaje de células mutadas era bajo. En otros dos casos, sin embargo, la mutación sólo se detectó por secuenciación. En el primero de ellos el paciente tenía la mutación V769M, una mutación que no está incluida en el kit comercial de manera que el resultado fue negativo. En el segundo caso, el paciente presentaba la mutación G719S en el exón 18 (mutación incluida en el kit comercial), pero también presentaba, simultáneamente, la mutación E709A en el mismo exón, la cual podría afectar a la correcta hibridación de la sonda con el ADN generando un resultado falso negativo con el ensayo TheraScreen.

Conclusión:Tanto la secuenciación directa como el ensayo TheraScreen muestran una buena correlación aunque el kit comercial presenta una mayor sensibilidad, especialmente en muestras que contienen un bajo porcentaje de células mutadas. No obstante, el kit comercial también puede mostrar resultados falsos negativos ya sea porque no incluye mutaciones poco frecuentes o bien porque el paciente presente mutaciones adicionales, cercanas a las mutaciones incluidas en el kit , que afecten a la unión de la sonda al ADN generando un falso negativo.

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