y División Española de la International Academy of Pathology
XX Congreso de la Sociedad Española de Citología
I Congreso de la Sociedad Española de Patología Forense
INFORMACIÓN SOBRE COMUNICACIONES ORALES Y PÓSTERES ACEPTADOS
Comunicación oral nº 110. Tema: Técnicos de Anatomía Patológica (TEAP)
Estudio comparativo de la técnica de secuenciación directa y el kit TheraScreen en el análisis de mutaciones de KRAS
E Moragón Massey, L Martínez Avilés, C Montagut Viladot, M Iglesias Coma, E Torres Fernández, G Navarro Viu, M Gallén Castillo, M García García, S Serrano Figueras, B Bellosillo
Hospital del Mar
estermoragon@hotmail.comIntroducción:La terapia anti-EGFR mediante el uso de anticuerpos monoclonales o moléculas inhibidoras del receptor de EGFR es una opción de tratamiento para pacientes con carcinoma colorrectal metastásico y carcinoma de pulmón de célula no pequeña, respectivamente. Las mutaciones en KRAS predicen una falta de respuesta al tratamiento con este tipo de terapia. OBJETIVO Comparar la sensibilidad analítica de dos metodologías distintas para la detección de mutaciones en el gen KRAS.
Material y métodos:Se ha analizado las mutaciones en KRAS (codones 12 y 13) en una cohorte de 162 pacientes con cáncer colorrectal metastásico y en 13 pacientes con cáncer de pulmón, mediante dos metodologías:1. Amplificación del exón 2 de KRAS mediante PCR y posterior secuenciación utilizando BigDye v3.1y análisis en un Genetic Analyzer 3500Dx y 2. Análisis mediante el kit TheraScreen utilizando un equipo de PCR cuantitativa en tiempo real, LightCycler480.
Resultados:El análisis de KRAS mostró una concordancia del 97% entre las dos técnicas. En 109 pacientes no se detectaron mutaciones en KRAS por ninguna de las técnicas. Cincuenta y tres (33%) pacientes presentaron mutaciones en KRAS, pero en 6 casos el resultado de la secuenciación era no concluyente y se necesitó el ensayo TheraScreen para confirmar su positividad. Además, en tres casos se detectaron mutaciones con TheraScreen que no se pudieron detectar mediante secuenciación ya que el porcentaje de células mutadas era bajo. En un cuarto caso se detectó la mutación G13C mediante secuenciación pero el resultado de la PCR cuantitativa fue negativo ya que dicha mutación no está incluida en el kit TheraScreen. Además, se analizó KRAS en 13 pacientes con cáncer de pulmón. Diez de ellos presentaban una positividad dudosa mediante secuenciación y se utilizó TheraScreen para confirmar los resultados. Finalmente, cuatro casos presentaron mutaciones poco frecuentes (G13R, G13C y G12F). El kit TheraScreen no detectó las dos mutaciones que afectaban al codon 13, ya que no están incluidas en el kit ,y en cuanto a la G12F el ensayo mostró una positividad inespecífica para la mutación G12V.
Conclusión: Tanto la secuenciación directa como el ensayo con el kit TheraScreen muestran una buena correlación aunque el kit comercial presenta una mayor sensibilidad, especialmente en muestras que contienen un bajo porcentaje de células mutadas. Sin embargo, el kit comercial puede ser menos específico que la secuenciación y sería necesario incluir otras mutaciones de KRAS para evitar falsos negativos.
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| © SEAP. Sociedad Española de Anatomía Patológica | Actualizado: 11/06/2011 |